Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
RAP1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401709
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- RAP1 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico RAP1, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: RAP1 Anticuerpo (4C8/1): sc-53434
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
RAP1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-401709 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
TERF2IP codifica RAP1, un componente central del complejo shelterina que se asocia con el factor de unión a repeticiones teloméricas 2 (TRF2) para ayudar a proteger los extremos de los cromosomas de señales inapropiadas de daño en el ADN y de fusiones extremo a extremo. Más allá de la protección de los extremos teloméricos, RAP1 contribuye a la homeostasis de la longitud de los telómeros, a las respuestas al estrés replicativo en los telómeros y a una estabilidad genómica más amplia mediante la coordinación de vías de reparación del ADN y de puntos de control. RAP1 también se ha implicado en la regulación transcripcional en sitios extrateloméricos, vinculando la biología de los telómeros con la cromatina y los programas de expresión génica. La desregulación de la función de TERF2IP/RAP1 es relevante para fenotipos de disfunción telomérica, inestabilidad genómica y procesos de transformación celular estudiados en modelos de cáncer y envejecimiento.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO RAP1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen TERF2IP en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del TERF2IP junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de TERF2IP tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína RAP1.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en TERF2IP para la investigación de la señalización de RAP1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de TERF2IP críticos para la función de RAP1
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de TERF2IP para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido RAP1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido RAP1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus TERF2IP. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR RAP1 (h) y el plásmido HDR RAP1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología TERF2IP para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana TERF2IP definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.