Plasmide CRISPR d'Activation (h) RANKL: sc-400304-ACT

TNFSF11 code RANKL, une cytokine de la superfamille du TNF qui agit comme ligand clé du récepteur RANK (TNFRSF11A) pour réguler la différenciation, l’activation et la survie des ostéoclastes. La signalisation induite par RANKL mobilise des adaptateurs TRAF pour activer les cascades NF-κB et MAPK, reliant les signaux immunitaires au remodelage osseux et aux réponses inflammatoires. Au-delà de ses rôles en ostéo-immunologie, RANKL contribue à l’organogenèse des ganglions lymphatiques et influence la communication entre cellules dendritiques et lymphocytes T. Une activité dérégulée de l’axe RANKL/RANK/OPG est associée à une perte osseuse pathologique et à des phénotypes de remodelage, et fait l’objet de nombreuses études dans les contextes de modifications squelettiques liées à l’inflammation et d’interactions entre tumeurs et microenvironnement osseux.

RANKL Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TNFSF11 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

RANKL Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TNFSF11 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TNFSF11, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de RANKL. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TNFSF11 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de RANKL au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie RANKL dans les cellules tumorales présentant une expression de TNFSF11 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.