Plásmido CRISPR de Activación (h) Ran BP-3: sc-405001-ACT

RANBP3 codifica Ran BP-3, una proteína de unión a RanGTP que actúa como cofactor de la exportación nuclear dependiente de CRM1/XPO1, ayudando a regular la distribución nucleocitoplasmática de proteínas y ARN. Al modular los gradientes de RanGTP y el ensamblaje de los complejos de exportación, Ran BP-3 contribuye al control de programas de expresión génica, la progresión del ciclo celular y la señalización sensible al estrés a través de la dinámica del transporte nuclear. La exportación nuclear desregulada es una característica recurrente del cáncer y de otros estados proliferativos o inflamatorios, lo que convierte a RANBP3 en un objetivo útil para estudios mecanísticos que vinculan defectos de transporte con redes transcripcionales alteradas. En células humanas, la perturbación de la expresión de RANBP3 se utiliza comúnmente para explorar la conectividad de vías entre el tráfico nuclear, la regulación transcripcional y la proteostasis.

Ran BP-3 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de RANBP3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Ran BP-3 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus RANBP3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional RANBP3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Ran BP-3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo RANBP3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Ran BP-3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Ran BP-3 en células tumorales con expresión de RANBP3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.