Ral B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-425679

Übersicht

Ralb kodiert die kleine GTPase RalB, einen Ras-ähnlichen molekularen Schalter, der zwischen GDP- und GTP-gebundenen Zuständen wechselt und so Membrantransport und Umbau des Zytoskeletts reguliert. RalB signalisiert über Effektoren wie den Exocyst-Komplex und RalBP1, um Vesikel-Andocken, Endozytose, Zellpolarität und Zytokinese zu steuern, und kann über mit der TBK1-Aktivierung verknüpfte Signalwege mit Stress- und angeborener Immunantwort-Signalen interagieren. Über diese Prozesse beeinflusst RalB Programme der Zellproliferation, Migration und des Überlebens, die häufig im Kontext der Signalabgabe onkogener Ras-Netzwerke und der Invasion von Tumorzellen untersucht werden. In Mausmodellen ermöglicht eine Störung von Ralb mechanistische Untersuchungen von Signalknoten kleiner GTPasen, die in der Krebsbiologie und in entzündungsassoziierten Phänotypen eine Rolle spielen.

Das Ral B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Ralb-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Ralb-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Ralb nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Ral B-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Ralb-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Ral B-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Ralb-Exone abzielen, die für die Ral B-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Ralb-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Ral B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Ral B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Ralb-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Ral B HDR-Plasmid (m) und Ral B HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Ralb-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Ralb-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.