Plasmide CRISPR d'Activation (h) Radixin: sc-403440-ACT

Le gène humain **RDX** code la radixine, un adaptateur du cytosquelette de la famille ERM qui relie l’actine F corticale aux protéines transmembranaires afin d’organiser les domaines membranaires, de réguler la forme cellulaire et de stabiliser les contacts cellule–cellule et cellule–matrice. La radixine participe au remodelage du cortex d’actine dans des structures telles que les microvillosités et les sites d’adhérence, et intègre des signalisations impliquant les GTPases de la famille Rho, des voies dépendantes de la PI3K, ainsi que des complexes d’échafaudage coordonnant la localisation et le trafic des récepteurs. Par son rôle dans la mécanotransduction et le couplage membrane–cytosquelette, la radixine influence notamment la polarité épithéliale, la migration et l’endocytose. Une fonction ERM dérégulée et une expression, une localisation ou une distribution subcellulaire altérées de **RDX** ont été associées à des phénotypes pertinents pour l’invasion et la métastase des cellules cancéreuses, ainsi qu’à des dysfonctionnements spécifiques de certains tissus, notamment dans des contextes de barrière et neuronaux.

Radixin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de RDX sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Radixin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus RDX dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription RDX, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Radixin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus RDX natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Radixin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Radixin dans les cellules tumorales présentant une expression de RDX silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.