Radixin Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403440-ACT

Il gene umano **RDX** codifica la **radixina**, un adattatore citoscheletrico della famiglia **ERM** che collega l’**F-actina** corticale alle proteine transmembrana per organizzare i domini di membrana, regolare la forma cellulare e stabilizzare i contatti cellula–cellula e cellula–matrice. La radixina partecipa al rimodellamento della corteccia di actina in strutture come i microvilli e i siti di adesione e integra la segnalazione mediata dalle GTPasi della famiglia Rho, dalle vie dipendenti da PI3K e da complessi scaffold che coordinano la localizzazione e il traffico dei recettori. Grazie al suo ruolo nella meccanotrasduzione e nell’accoppiamento membrana–citoscheletro, la radixina influenza processi quali la polarità epiteliale, la migrazione e l’endocitosi. Una funzione ERM disregolata e un’alterata espressione o localizzazione di RDX sono state associate a fenotipi rilevanti per l’invasione e la metastasi delle cellule tumorali, nonché a disfunzioni tessuto-specifiche in contesti di barriera e neuronali.

Radixin Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di RDX senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Radixin Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus RDX nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione RDX, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Radixin. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus RDX nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Radixin nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Radixin nelle cellule tumorali con espressione di RDX silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.