Rac 2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401157-ACT

RAC2 kodiert Rac2, eine im hämatopoetischen System angereicherte kleine GTPase der Rho-Familie, die zwischen GDP- und GTP-gebundenen Zuständen wechselt, um den Umbau des Aktin-Zytoskeletts, die Zellpolarität und den Membrantransport zu koordinieren. Rac2 wirkt nachgeschaltet von Immunrezeptor-, Integrin- und Chemokin-Signalwegen und reguliert die Aktivierung der NADPH-Oxidase, die Produktion reaktiver Sauerstoffspezies sowie antimikrobielle Antworten von Phagozyten; zugleich beeinflusst es MAPK- und PI3K-abhängige Signalausgänge. In Leukozyten unterstützt Rac2 Chemotaxis, Adhäsion, Degranulation und die Dynamik der immunologischen Synapse und verknüpft so die Kontrolle des Zytoskeletts mit entzündlichen und angeborenen Immunwegen. Eine dysregulierte RAC2-Aktivität oder -Expression wurde mit einer veränderten Wirtsabwehr und Immunhomöostase in Verbindung gebracht, was RAC2 für die Untersuchung von Mechanismen der Immundefizienz, entzündlicher Phänotypen und der Signalübertragung in hämatologischen Zellen relevant macht.

Rac 2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen RAC2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Rac 2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des RAC2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der RAC2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Rac 2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native RAC2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Rac 2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Rac 2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem RAC2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.