Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
rabphilin-3A Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-404628
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- rabphilin-3A El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico rabphilin-3A, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: rabphilin-3A Anticuerpo (D-6): sc-393197
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
rabphilin-3A Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-404628 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
RPH3A codifica rabfilina-3A, un efector de Rab3A/Rab27 enriquecido en neuronas que acopla la señalización dependiente de Ca²⁺ a la exocitosis regulada de vesículas. Mediante interacciones con pequeñas GTPasas y componentes de las vesículas sinápticas, la rabfilina-3A contribuye al acoplamiento (docking) de vesículas, su preparación (priming) y la probabilidad de liberación, favoreciendo una secreción eficiente de neurotransmisores. Su actividad se relaciona con vías presinápticas de tráfico de membrana y con la dinámica del citoesqueleto que coordinan el reciclaje vesicular y la plasticidad sináptica. La desregulación del transporte de vesículas sinápticas y de la maquinaria de liberación en la que participa RPH3A es relevante para estudios mecanísticos de la biología de enfermedades neurológicas y neuropsiquiátricas.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO rabphilin-3A (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen RPH3A en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del RPH3A junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de RPH3A tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína rabphilin-3A.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en RPH3A para la investigación de la señalización de rabphilin-3A, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de RPH3A críticos para la función de rabphilin-3A
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de RPH3A para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido rabphilin-3A CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido rabphilin-3A CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus RPH3A. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR rabphilin-3A (h) y el plásmido HDR rabphilin-3A (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología RPH3A para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana RPH3A definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.