Rab 5A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-435445

Übersicht

Rab5a kodiert die kleine GTPase Rab5A, einen zentralen Regulator der Dynamik früher Endosomen, der über Effektoren wie EEA1 und PI3K-Signalknoten die clathrinvermittelte Endozytose, das Andocken und die Fusion von Vesikeln sowie die endosomale Reifung koordiniert. Durch die Kontrolle von Rezeptorinternalisierung und -transport beeinflusst Rab5A die Stärke und Dauer nachgeschalteter Signalwege, darunter EGFR/MAPK und PI3K/AKT, und trägt zum Membranrecycling sowie zur Sortierung von Fracht in Richtung lysosomaler Degradation bei. Die Aktivität von Rab5A ist zudem über eine Endosom–Aktin-Wechselwirkung mit dem Umbau des Zytoskeletts und dem Neuritenauswachsen verknüpft. Eine fehlregulierte endozytotische Trafficking-Maschinerie unter Beteiligung von Rab5a wurde mit endosomalen Defekten im Zusammenhang mit Neurodegeneration, einer veränderten Handhabung von Immunrezeptoren sowie abweichender Wachstumsfaktor-Rezeptor-Signalgebung in proliferativen Krankheitsmodellen in Verbindung gebracht.

Das Rab 5A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Rab5a-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Rab5a-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Rab5a nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Rab 5A-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Rab5a-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Rab 5A-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Rab5a-Exone abzielen, die für die Rab 5A-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Rab5a-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Rab 5A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Rab 5A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Rab5a-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Rab 5A HDR-Plasmid (m) und Rab 5A HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Rab5a-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Rab5a-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.