QKI CRISPR Activation Plasmid (h): sc-405082-ACT

QKI (Quaking) ist ein RNA-bindendes Protein, das die posttranskriptionelle Genexpression durch die Kontrolle des Prä‑mRNA-Spleißens, der mRNA‑Stabilisierung, des Exports und der Translation reguliert. Es ist ein zentraler Modulator von Zellschicksalsprogrammen, mit ausgeprägten Funktionen in der Oligodendrozytendifferenzierung und Myelinisierung, und koordiniert RNA‑Regulons, die an der Organisation des Zytoskeletts und der Signaltransduktion beteiligt sind. QKI greift in Signalwege ein, die epithelial‑mesenchymale Dynamiken, Apoptose und Stressantworten steuern, indem es die Nutzung von Transkript‑Isoformen und den RNA‑Umsatz formt. Eine fehlregulierte QKI‑Expression oder ein aberrantes Spleißen wurde mit neuroentwicklungsbezogenen und demyelinisierenden Phänotypen in Verbindung gebracht und wird häufig im Kontext der Krebsbiologie untersucht, wo veränderte RNA‑Prozessierung zu aberranter Proliferation und Invasion beiträgt.

QKI Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen QKI-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

QKI Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des QKI-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der QKI-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen QKI-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native QKI-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von QKI-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des QKI-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem QKI-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.