Nicht CRISPR-Daten: Das Bild veranschaulicht die Qualität von Antikörpern zur Visualisierung von CRISPR-Experimentergebnissen.
Nicht CRISPR-Daten: Das Bild veranschaulicht die Qualität von Antikörpern zur Visualisierung von CRISPR-Experimentergebnissen.
PUMA Double Nickase Plasmid (m): sc-431320-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das PUMA Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- PUMA Double-Nickase-Plasmid (m) und PUMA Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Bbc3 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: PUMAα: sc-377015
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
PUMA Double Nickase Plasmid (m) | sc-431320-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PUMA Double Nickase Plasmid (m2) | sc-431320-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das Mausgen **Bbc3** kodiert **PUMA** (p53 upregulated modulator of apoptosis), ein ausschließlich BH3-domänenhaltiges Mitglied der **BCL-2**-Familie, das die Permeabilisierung der äußeren Mitochondrienmembran fördert, indem es antiapoptotische BCL-2-Proteine neutralisiert und die Aktivierung von **BAX/BAK** ermöglicht. PUMA wird bei zellulärem Stress rasch induziert und integriert Signale aus p53-abhängigen DNA-Schadensantworten, dem Entzug von Wachstumsfaktoren und weiteren apoptotischen Reizen, um die intrinsische Apoptose und die Caspase-Aktivierung auszulösen. Über diese Signalwege trägt Bbc3/PUMA zur Regulation der Gewebehomöostase und zur Eliminierung geschädigter Zellen bei; seine Fehlregulation wird häufig im Zusammenhang mit Tumorsuppression, Neurodegeneration und dem Überleben von Immunzellen untersucht. Als zentraler Knotenpunkt in Apoptose- und Stressantwort-Netzwerken wird PUMA in Mausmodellen häufig eingesetzt, um Mechanismen von Zellschicksalsentscheidungen und Checkpoint-Kontrolle zu analysieren.
PUMA Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Bbc3-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Bbc3 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Bbc3-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Bbc3-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.