PTPRH CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406293

Übersicht

PTPRH (Protein-Tyrosin-Phosphatase, Rezeptor-Typ H) ist eine transmembrane, rezeptorähnliche Phosphatase, die Tyrosinphosphorylierungs-Signalwege an der Zelloberfläche moduliert und dadurch nachgeschaltete Signalwege formt, welche Proliferation, Adhäsion und Zellmotilität steuern. Indem PTPRH die Aktivität von Rezeptor-Tyrosinkinasen sowie die damit verbundenen Signaloutputs der MAPK- und PI3K/AKT-Wege ausbalanciert, kann es die Reaktionsfähigkeit auf Wachstumsfaktoren und das Verhalten epithelialer Zellen beeinflussen. Eine dysregulierte Expression oder Aktivität von PTPRH wurde in mehreren Krebs-Kontexten mit veränderten onkogenen Signalzuständen und tumorassoziierten Phänotypen in Verbindung gebracht, was es für die Analyse phosphorylierungsabhängiger Regulationsnetzwerke relevant macht. Als membranassoziierte Phosphatase eignet es sich zudem zur Untersuchung der Signalintegration zwischen extrazellulären Reizen und intrazellulären Kinase/Phosphatase-Schaltkreisen.

Das PTPRH CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des PTPRH-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des PTPRH-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von PTPRH nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PTPRH-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von PTPRH-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PTPRH-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf PTPRH-Exone abzielen, die für die PTPRH-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere PTPRH-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom PTPRH CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom PTPRH CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des PTPRH-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PTPRH HDR-Plasmid (h) und PTPRH HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von PTPRH-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten PTPRH-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.