Plásmido CRISPR de Activación (h) PTPσ: sc-402631-ACT

PTPRS codifica la fosfatasa tirosina-proteína receptora tipo S (PTPσ), una fosfatasa de tipo receptor que modula la señalización dependiente de la fosforilación en la superficie celular. PTPσ participa en la adhesión celular, la guía axonal y la organización sináptica al integrar señales de la matriz extracelular y de proteoglucanos con vías intracelulares de quinasas que controlan la dinámica del citoesqueleto y el crecimiento de neuritas. En el sistema nervioso, la alteración de la señalización de PTPσ se ha asociado con respuestas regenerativas deficientes y remodelación sináptica, mientras que en contextos oncológicos la desregulación de PTPRS se ha vinculado con alteraciones en la señalización de factores de crecimiento y cambios en la migración celular. Estas características biológicas hacen de PTPRS una diana útil para analizar redes de señalización de fosfotirosina que gobiernan la diferenciación, la conectividad y los fenotipos invasivos en modelos celulares humanos.

PTPσ El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PTPRS sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

PTPσ El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PTPRS en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PTPRS, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de PTPσ. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PTPRS y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de PTPσ en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía PTPσ en células tumorales con expresión de PTPRS silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.