PSM Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401947

Descripción general

FOLH1 codifica el antígeno de membrana específico de la próstata (PSM), una metalopeptidasa transmembrana de tipo II con actividad de hidrolasa de folato y de NAALADasa que modula la disponibilidad extracelular de glutamato y el metabolismo del folato. PSM participa en el procesamiento, dependiente de peptidasas, de folatos poliglutamados y neuropéptidos, influyendo en la señalización de aminoácidos y en el manejo de nutrientes en la superficie celular. En humanos, la expresión de FOLH1 se utiliza ampliamente como marcador molecular en biología prostática y también se detecta en la neovasculatura asociada a tumores, lo que la hace relevante para estudios de señalización de células cancerosas, interacciones con el microambiente y regulación específica de linaje. Las alteraciones en la actividad y la expresión de PSM se han vinculado a cambios metabólicos asociados a enfermedades y al tráfico mediado por receptores, lo que respalda investigaciones mecanísticas en modelos de oncología y neurobiología.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO PSM (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen FOLH1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del FOLH1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de FOLH1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PSM.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en FOLH1 para la investigación de la señalización de PSM, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de FOLH1 críticos para la función de PSM
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de FOLH1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido PSM CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido PSM CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus FOLH1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PSM (h) y el plásmido HDR PSM (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología FOLH1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana FOLH1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.