Plasmide CRISPR/Cas9 KO PSIP1 (h): sc-404589

Présentation

PSIP1 (également connu sous le nom de LEDGF/p75) est un cofacteur transcriptionnel associé à la chromatine qui se fixe aux gènes actifs marqués par H3K36me3 via son domaine PWWP et contribue à l’organisation de l’élongation transcriptionnelle, de la maturation de l’ARN et des réponses aux dommages de l’ADN. En interagissant avec des facteurs impliqués dans le stress réplicatif et la réparation des cassures double brin, PSIP1 contribue à la stabilité du génome et à la survie cellulaire en conditions génotoxiques. PSIP1 est également connu pour arrimer l’intégrase virale à la chromatine, orientant ainsi la sélection des sites d’intégration, et il participe à des programmes régulateurs liés à la transcription oncogénique et à la signalisation du stress cellulaire. La dérégulation des interactions chromatine–PSIP1 a été étudiée dans des contextes tels que les hémopathies malignes et d’autres cancers, où le contrôle transcriptionnel et l’équilibre des voies de réparation sont altérés.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PSIP1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PSIP1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PSIP1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PSIP1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PSIP1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PSIP1 pour l'étude de la signalisation de PSIP1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PSIP1 essentiels à la fonction de PSIP1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PSIP1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PSIP1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le PSIP1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PSIP1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PSIP1 plasmide HDR (h) et le PSIP1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PSIP1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PSIP1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.