Plásmido Doble Nickase (h) PSD-95: sc-400830-NIC

DLG4 codifica PSD-95 (proteína 95 de la densidad postsináptica), un importante andamiaje MAGUK que organiza las sinapsis excitatorias al agrupar receptores NMDA, complejos de receptores AMPA y proteínas de señalización asociadas en la densidad postsináptica. A través de sus dominios PDZ, SH3 y GK, PSD-95 regula la maduración sináptica, el tráfico de receptores y la plasticidad dependiente de la actividad, acoplando la transmisión glutamatérgica con vías aguas abajo que modelan la estructura de las espinas dendríticas y la señalización dependiente de calcio. La alteración de complejos centrados en PSD-95 se asocia con conectividad sináptica modificada y cambios en la excitabilidad de la red, lo que convierte a DLG4 en un punto de entrada molecular ampliamente utilizado para estudiar mecanismos de enfermedades del neurodesarrollo y neuropsiquiátricas. En modelos neuronales humanos, la función de DLG4 se evalúa con frecuencia para desentrañar el ensamblaje de sinapsis, el equilibrio excitación/inhibición y la dinámica de señalización entre receptores y andamiajes.

PSD-95 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus DLG4 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de DLG4. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de DLG4. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con DLG4 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.