Plasmide CRISPR d'Activation (h) PSAT1: sc-403001-ACT

Le gène humain **PSAT1** code la phosphosérine aminotransférase 1, une enzyme dépendante du phosphate de pyridoxal qui catalyse la conversion du 3‑phosphohydroxypyruvate en 3‑phosphosérine dans la voie de biosynthèse *de novo* de la L‑sérine. En favorisant la disponibilité de la sérine et de la glycine, PSAT1 contribue au métabolisme à un carbone, à la biosynthèse des nucléotides, à l’homéostasie redox et à la fonction mitochondriale, reliant le métabolisme central du carbone à la capacité proliférative. La régulation de PSAT1 est fréquemment étudiée dans le contexte des réponses au stress des acides aminés pilotées par ATF4 et de la signalisation intégrée du stress, avec des effets en aval sur les programmes de croissance anaboliques. Une expression dérégulée de PSAT1 a été associée à la reprogrammation métabolique observée dans plusieurs modèles cellulaires pertinents pour des maladies, notamment le métabolisme tumoral et des phénotypes neurodéveloppementaux.

PSAT1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PSAT1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PSAT1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PSAT1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PSAT1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PSAT1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PSAT1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PSAT1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PSAT1 dans les cellules tumorales présentant une expression de PSAT1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.