pS2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402867

Panoramica

TFF1, noto anche come pS2, codifica un fattore trefoil secreto che contribuisce all’integrità della barriera epiteliale e alla riparazione della mucosa promuovendo la migrazione cellulare e regolando la restituzione dopo una lesione. Nei tessuti umani è espresso in modo marcato nell’epitelio gastrico e mammario ed è comunemente regolato da programmi trascrizionali sensibili agli ormoni, collegandolo alla differenziazione e ai fenotipi dell’epitelio luminale. pS2 partecipa a vie di segnalazione legate allo stress e all’infiammazione che influenzano l’omeostasi epiteliale, incluse interazioni con le mucine e la modulazione di risposte associate ai fattori di crescita. L’espressione deregolata di TFF1 è spesso utilizzata come indicatore molecolare in studi sulla metaplasia gastrointestinale e sulla biologia del carcinoma mammario ER-positivo, dove può riflettere cambiamenti dello stato epiteliale e della segnalazione del microambiente.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO pS2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene TFF1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del TFF1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto TFF1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina pS2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di TFF1 per lo studio della segnalazione di pS2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni TFF1 critici per la funzione di pS2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di TFF1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal pS2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal pS2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus TFF1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal pS2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR pS2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia TFF1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio TFF1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.