PRX1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405108-ACT

O PRRX1 codifica a proteína homeobox relacionada em par PRX1, um fator de transcrição que regula decisões de destino de células mesenquimais durante o desenvolvimento e a remodelação tecidual. A PRX1 influencia programas de transição epitélio–mesênquima (EMT), a ativação de fibroblastos e a organização da matriz extracelular ao coordenar redes transcricionais envolvidas em migração, adesão e diferenciação. Na biologia humana, alterações na atividade de PRRX1 têm sido associadas a mudanças na sinalização estromal e a fenótipos invasivos, tornando-o relevante para estudos da dinâmica do microambiente tumoral, de vias associadas à fibrose e da progressão metastática. Como regulador nuclear, a PRX1 é frequentemente usada como marcador e como nó mecanístico em rastreamento de linhagem e mapeamento de circuitos transcricionais em estados celulares mesenquimais e semelhantes a células-tronco.

PRX1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PRRX1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PRX1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PRRX1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PRRX1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PRX1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PRRX1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PRX1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PRX1 em células tumorais com expressão de PRRX1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.