PRR14 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-433320

Panoramica

Prr14 codifica PRR14, una proteina nucleare ricca di prolina coinvolta nell’organizzazione dell’architettura nucleare attraverso interazioni con la lamina nucleare e la cromatina. PRR14 contribuisce ad ancorare l’eterocromatina alla periferia nucleare, influenzando lo stato epigenetico, la stabilità del genoma e i cambiamenti dell’organizzazione nucleare legati al ciclo cellulare. Un’alterata regolazione dei contatti tra lamina nucleare e cromatina è stata associata a difetti nei programmi di differenziamento e a segnali proliferativi aberranti, rendendo PRR14 un nodo utile per studiare la regolazione genica dipendente dall’involucro nucleare. Nei sistemi murini, la perturbazione di Prr14 può aiutare a indagare come l’organizzazione spaziale del genoma si interfacci con il controllo trascrizionale e con le vie di risposta allo stress.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PRR14 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Prr14 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Prr14 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Prr14 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PRR14.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Prr14 per lo studio della segnalazione di PRR14, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Prr14 critici per la funzione di PRR14
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Prr14 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PRR14 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal PRR14 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Prr14. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PRR14 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR PRR14 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Prr14 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Prr14 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.