PRPS2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-404095

Übersicht

PRPS2 (Phosphoribosylpyrophosphat-Synthetase 2) ist ein zytosolisches Enzym, das die Synthese von 5-Phosphoribosyl-1-pyrophosphat (PRPP) katalysiert, einem Schlüsselmetaboliten, der für die de-novo- und Salvage-Biosynthese von Purin- und Pyrimidin-Nukleotiden benötigt wird. Durch die Kontrolle der PRPP-Verfügbarkeit verknüpft PRPS2 den Fluss von Ribosephosphaten mit der DNA-/RNA-Synthese, nukleotidabhängiger Signalübertragung und der zellulären Proliferation und integriert dabei Signale aus der Glykolyse und dem Pentosephosphatweg. Eine dysregulierte Nukleotidmetabolik und die PRPP-Homöostase sind mit einer veränderten Wachstumskontrolle und metabolischen Umprogrammierung assoziiert, wie sie in verschiedenen Krankheitskontexten, einschließlich Krebs und erblichen Störungen des Purinstoffwechsels, beobachtet werden. PRPS2 wird daher häufig im Zusammenhang mit Mechanismen von Nukleotidstress, Replikationsdynamik und metabolischen Verwundbarkeiten in menschlichen Zellen untersucht.

Das PRPS2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des PRPS2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des PRPS2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von PRPS2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PRPS2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von PRPS2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PRPS2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf PRPS2-Exone abzielen, die für die PRPS2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere PRPS2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom PRPS2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom PRPS2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des PRPS2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PRPS2 HDR-Plasmid (h) und PRPS2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von PRPS2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten PRPS2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.