Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Prohibitin Double Nickase Plasmid (m): sc-422218-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Prohibitin Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Prohibitin Double-Nickase-Plasmid (m) und Prohibitin Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Phb abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Prohibitin: sc-377037
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Prohibitin Double Nickase Plasmid (m) | sc-422218-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Prohibitin Double Nickase Plasmid (m2) | sc-422218-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das murine **Phb**-Gen kodiert Prohibitin, ein evolutionär konserviertes Scaffold-Protein, das in der inneren Mitochondrienmembran angereichert ist. Dort bildet es zusammen mit **PHB2** hochmolekulare Komplexe, die Komponenten der Atmungskette stabilisieren und die Architektur der Cristae bewahren. Prohibitin beeinflusst die mitochondriale Proteostase, das Membranpotenzial und die Mitophagie und ist in Signalwege eingebunden, die die oxidative Phosphorylierung, die Homöostase reaktiver Sauerstoffspezies und die Zellzykluskontrolle regulieren. Über diese Funktionen wirkt **PHB** auf metabolische Anpassungsprozesse und Stressantworten, die bei Neurodegeneration, kardiometabolischen Störungen und in der Krebsbiologie häufig dysreguliert sind. **Phb** ist daher ein häufig genutzter Ansatzpunkt, um mitochondriale Qualitätskontrolle und das Signalkreuzgespräch zwischen Organellfunktion und nukleären Transkriptionsprogrammen zu untersuchen.
Prohibitin Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Phb-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Phb abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Phb-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Phb-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.