Partículas Lentivirales de Activación (m) PRL-R: sc-422418-LAC

Mouse Prlr codifica el receptor de prolactina (PRL-R), un receptor de citocinas de clase I que media la señalización dependiente de prolactina en el desarrollo de la glándula mamaria, la fisiología reproductiva, la regulación metabólica y la función de las células inmunitarias. La unión del ligando promueve la dimerización del receptor y la activación de JAK2 con programas transcripcionales posteriores mediados por STAT5, y también puede interactuar con las vías PI3K/AKT y MAPK/ERK para influir en la proliferación, la diferenciación y la supervivencia. La señalización de PRL-R contribuye a la comunicación cruzada entre redes endocrinas e inflamatorias, lo que convierte a Prlr en un nodo útil para estudiar la transcripción sensible a hormonas, la especificación de linajes epiteliales y la dinámica de señalización de receptores tipo citocina. La alteración de la actividad de la vía PRL-R se ha asociado con un remodelado tisular desregulado y un control aberrante del crecimiento en contextos sensibles a hormonas, lo que respalda la investigación mecanística en modelos de biología endocrina y mamaria.

Las partículas de activación lentiviral PRL-R (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Prlr en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral PRL-R (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Prlr, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de PRL-R. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Prlr y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.