PRIM2A Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422397

Panoramica

Prim2 codifica PRIM2A, la grande subunità catalitica della primasi del DNA all’interno del complesso Pol α–primasi, che sintetizza i primer RNA–DNA necessari per avviare la replicazione del DNA sia sul filamento guida sia su quello ritardato. PRIM2A supporta l’attivazione delle origini di replicazione, l’innesco dei frammenti di Okazaki e la progressione complessiva della fase S, e la sua funzione è strettamente integrata con l’assemblaggio del replisoma e con lo switch delle DNA polimerasi. Ci si aspetta che la compromissione dell’attività della primasi aumenti lo stress replicativo, riduca la stabilità delle forcelle e accresca la dipendenza dalle vie di risposta al danno del DNA e dai checkpoint. In quanto fattore centrale della replicazione, PRIM2A è di ampio interesse per studi sul mantenimento del genoma, sul controllo della proliferazione cellulare e sui meccanismi che collegano difetti di replicazione a patologie associate a instabilità genomica.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PRIM2A (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Prim2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Prim2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Prim2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PRIM2A.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Prim2 per lo studio della segnalazione di PRIM2A, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Prim2 critici per la funzione di PRIM2A
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Prim2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PRIM2A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal PRIM2A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Prim2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PRIM2A Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR PRIM2A (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Prim2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Prim2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.