PRIM2A Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422397

Descripción general

Prim2 codifica PRIM2A, la subunidad catalítica grande de la primasa de ADN dentro del complejo Pol α–primasa, que sintetiza cebadores de ARN–ADN necesarios para iniciar la replicación del ADN tanto en la hebra líder como en la hebra rezagada. PRIM2A contribuye a la activación de los orígenes de replicación, al cebado de los fragmentos de Okazaki y a la progresión global de la fase S, y su función está estrechamente integrada con el ensamblaje del replisoma y el cambio de polimerasa de ADN. Se espera que la alteración de la actividad de la primasa eleve el estrés replicativo, comprometa la estabilidad de la horquilla de replicación y aumente la dependencia de las vías de respuesta al daño del ADN y de los puntos de control. Como factor central de replicación, PRIM2A es de amplia relevancia para estudios sobre el mantenimiento del genoma, el control de la proliferación celular y los mecanismos que vinculan defectos de replicación con la biología de enfermedades asociadas a inestabilidad genómica.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO PRIM2A (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Prim2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Prim2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Prim2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PRIM2A.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Prim2 para la investigación de la señalización de PRIM2A, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Prim2 críticos para la función de PRIM2A
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Prim2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido PRIM2A CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido PRIM2A CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Prim2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PRIM2A (m) y el plásmido HDR PRIM2A (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Prim2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Prim2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.