Particules Lentivirales d'Activation (h) Presenilin 2: sc-403532-LAC

PSEN2 code la préséniline 2, un composant central catalytique du complexe γ‑sécrétase, qui assure la protéolyse intramembranaire de multiples protéines membranaires de type I, notamment APP et les récepteurs Notch. Par des événements de clivage régulés, la préséniline 2 contribue à la signalisation Notch, au traitement d’APP et à des effets en aval sur les décisions de destinée cellulaire, la fonction synaptique et les réponses inflammatoires. PSEN2 influence également le trafic endolysosomal, l’homéostasie du calcium et la fonction mitochondriale, reliant l’activité de la γ‑sécrétase à la protéostasie et aux voies de stress cellulaire. Des altérations génétiques et fonctionnelles de PSEN2 ont été associées à des mécanismes de maladies neurodégénératives et neuroinflammatoires, ce qui en fait une cible clé pour des études centrées sur des voies de signalisation dans les systèmes neuronaux et gliaux.

Les particules d'activation lentivirales Presenilin 2 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de PSEN2 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales Presenilin 2 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription PSEN2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de Presenilin 2. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif PSEN2 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.