PRDM15 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404932-ACT

PRDM15 (PR/SET-Domäne 15) kodiert einen nukleären, mit Chromatin assoziierten Regulator, der an der Transkriptionskontrolle beteiligt ist, indem er Chromatinzustände und Promotoraktivität moduliert. Als Mitglied der PRDM-Familie ist PRDM15 mit Programmen der Linienfestlegung und der Aufrechterhaltung der zellulären Identität verknüpft, indem es Genexpressionsnetzwerke koordiniert, die Proliferation und Differenzierung beeinflussen. Die PRDM15-abhängige Regulation überschneidet sich mit epigenetischen Signalwegen, die entwicklungsbezogene Transkriptionsschaltkreise formen, und kann Stoffwechsel- und Signalprogramme beeinflussen. Eine dysregulierte PRDM15-Expression oder -Aktivität wurde in krebsrelevanten Kontexten mit einer veränderten transkriptionellen Homöostase in Verbindung gebracht, was das Interesse an seiner Untersuchung in der onkogenen Transkription, in stammzellähnlichen Zuständen und bei der Kartierung epigenetischer Verwundbarkeiten begründet.

PRDM15 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen PRDM15-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

PRDM15 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des PRDM15-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der PRDM15-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen PRDM15-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native PRDM15-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von PRDM15-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des PRDM15-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem PRDM15-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.