Plásmido Doble Nickase (h) PRC1: sc-401679-NIC

PRC1 (regulador proteico de la citocinesis 1) es una proteína conservada asociada a microtúbulos que entrecruza microtúbulos antiparalelos en la zona media del huso y es esencial para el ensamblaje del huso central, el posicionamiento del surco de segmentación y la finalización de la citocinesis. Su actividad se coordina con quinasas mitóticas y proteínas motoras para asegurar una segregación fiel de los cromosomas y la abscisión, vinculando a PRC1 con vías centrales del ciclo celular y del huso mitótico. La desregulación de la expresión o la función de PRC1 puede alterar la fidelidad de la división celular y la estabilidad genómica, aspectos que se estudian comúnmente en el contexto de trastornos proliferativos y de la biología tumoral. Por ello, PRC1 se utiliza ampliamente como punto de entrada molecular para analizar la progresión mitótica, la arquitectura del huso y el control de los puntos de control de la citocinesis en células humanas.

PRC1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus PRC1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de PRC1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de PRC1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con PRC1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.