PRC1 Plasmide Double Nickase (h): sc-401679-NIC

PRC1 (protein regulator of cytokinesis 1) è una proteina conservata associata ai microtubuli che reticola microtubuli antiparalleli nella zona mediana del fuso ed è essenziale per l’assemblaggio del fuso centrale, il posizionamento del solco di clivaggio e il completamento della citocinesi. La sua attività è coordinata con chinasi mitotiche e proteine motrici per garantire una corretta segregazione dei cromosomi e l’abscissione, collegando PRC1 alle principali vie del ciclo cellulare e del fuso mitotico. La disregolazione dell’espressione o della funzione di PRC1 può compromettere la fedeltà della divisione cellulare e la stabilità del genoma, aspetti comunemente studiati nel contesto dei disturbi proliferativi e della biologia tumorale. PRC1 è quindi ampiamente utilizzata come punto d’ingresso molecolare per analizzare la progressione mitotica, l’architettura del fuso e il controllo dei checkpoint della citocinesi nelle cellule umane.

PRC1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus PRC1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di PRC1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di PRC1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con PRC1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.