PRAT4A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-404775

Übersicht

CNPY3 kodiert PRAT4A, einen im endoplasmatischen Retikulum (ER) lokalisierten Co-Chaperon, der die Reifung und Qualitätskontrolle von Toll-like-Rezeptoren (TLRs) und verwandten angeborenen Immunrezeptoren unterstützt. PRAT4A ist an Prozessen des frühen sekretorischen Wegs beteiligt, die Faltung, Glykosylierung und den Transport der Rezeptoren zu Endosomen oder zur Plasmamembran steuern, und beeinflusst dadurch NF-κB- und IRF-vermittelte entzündliche Signalübertragung. Eine veränderte PRAT4A-Funktion kann die Reaktionsfähigkeit von Mustererkennungsrezeptoren und Zytokinprogramme stören und verknüpft die Biologie von CNPY3 mit Studien zu Infektion, Entzündung und Immundysregulation. Seine Rolle in der Rezeptorbiogenese macht es zudem relevant für die Untersuchung von ER-Proteostase-Netzwerken und zelltypspezifischen Zuständen der angeborenen Signalgebung.

Das PRAT4A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CNPY3-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CNPY3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CNPY3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PRAT4A-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CNPY3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PRAT4A-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf CNPY3-Exone abzielen, die für die PRAT4A-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere CNPY3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom PRAT4A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom PRAT4A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CNPY3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PRAT4A HDR-Plasmid (h) und PRAT4A HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CNPY3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CNPY3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.