PRAMEF6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-417298

Übersicht

PRAMEF6 (preferenziell in Melanomen exprimiertes Antigen, Familienmitglied 6) ist ein primatenspezifisches Protein der PRAME-Familie mit stark eingeschränkter Expression in normalen Geweben und häufiger Derepression in Krebserkrankungen, was der Biologie von Krebs/Hoden-Antigenen entspricht. Obwohl PRAMEF6 funktionell weniger gut charakterisiert ist als PRAME, werden PRAME-Familienproteine mit transkriptioneller und epigenetischer Regulation in Verbindung gebracht und mit der Modulation der Retinsäure-Rezeptor-Signalgebung sowie zellulären Differenzierungsprogrammen assoziiert. Eine veränderte Expression von PRAME-Familiengenen steht im Zusammenhang mit Tumorzellproliferation, Immunerkennung und Linienidentität, wodurch PRAMEF6 ein nützlicher Marker und mechanistisches Ziel für die Untersuchung onkogener transkriptioneller Zustände ist. Forschungsanwendungen umfassen die Profilierung PRAMEF6-abhängiger Genexpressionsnetzwerke und die Analyse regulatorischer Mechanismen, die seine aberrante Aktivierung in malignen Kontexten ermöglichen.

Das PRAMEF6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des PRAMEF6-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des PRAMEF6-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von PRAMEF6 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PRAMEF6-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von PRAMEF6-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PRAMEF6-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf PRAMEF6-Exone abzielen, die für die PRAMEF6-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere PRAMEF6-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom PRAMEF6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom PRAMEF6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des PRAMEF6-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PRAMEF6 HDR-Plasmid (h) und PRAMEF6 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von PRAMEF6-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten PRAMEF6-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.