PPP1R6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406901

Übersicht

PPP1R3D kodiert die regulatorische Untereinheit PPP1R6, einen glykogenbindenden Adapter, der die Proteinphosphatase 1 (PP1) zu Substraten lenkt, die an Kohlenhydratspeicherung und Energiehomöostase beteiligt sind. Durch die Steuerung der subzellulären Lokalisation von PP1 und ihres katalytischen Zugangs kann PPP1R6 den Phosphorylierungszustand glykogenstoffwechselrelevanter Enzyme beeinflussen und dadurch die Glykogensynthese und -mobilisierung in menschlichen Zellen mitbestimmen. Dieser Regulationsknotenpunkt überschneidet sich mit nährstoffsensitiven sowie Kinase-/Phosphatase-Signalnetzwerken, die metabolische Flüsse, zelluläre Wachstumsbedingungen und Stressantworten koordinieren. Eine gestörte Glykogenverwertung und Fehlregulation der Phosphatasesignalisierung sind wiederkehrende Merkmale metabolischer und proliferativer Erkrankungen, weshalb PPP1R6 einen nützlichen Ausgangspunkt für mechanistische Untersuchungen der Phosphoregulation in krankheitsrelevanten Kontexten darstellt.

Das PPP1R6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des PPP1R3D-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des PPP1R3D-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von PPP1R3D nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PPP1R6-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von PPP1R3D-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PPP1R6-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf PPP1R3D-Exone abzielen, die für die PPP1R6-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere PPP1R3D-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom PPP1R6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom PPP1R6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des PPP1R3D-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PPP1R6 HDR-Plasmid (h) und PPP1R6 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von PPP1R3D-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten PPP1R3D-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.