PPP1R12C Lentiviral Activation Particles (h): sc-412332-LAC

PPP1R12C kodiert die myosinphosphatase-gerichtete Untereinheit 3 (MYPT3), eine regulatorische Komponente der Proteinphosphatase 1, die dazu beiträgt, die katalytische Aktivität von PP1 auf zytoskelettale Substrate auszurichten. Durch die Kontrolle der Phosphorylierungszustände der Myosin-Leichtkette und verwandter Aktomyosin-Regulatoren trägt PPP1R12C zu Zellkontraktilität, Adhäsionsdynamik und Motilität bei und integriert dabei Signaleingänge aus RhoA/ROCK und anderen Kinase-Signalwegen. Eine veränderte PP1-Zielsteuerung und Myosinphosphatase-Funktion kann die Umgestaltung des Zytoskeletts und die Mechanotransduktion stören – Prozesse, die häufig mit Tumorzellinvasion, fibroseassoziiertem Remodeling und Funktionsstörungen der vaskulären glatten Muskulatur in Verbindung gebracht werden. Die Expression von PPP1R12C und ihre phosphorylierungsabhängige Regulation sind daher relevant für Studien zur Organisation von Stressfasern, zur Kontrolle der Zellform und zum Signalweg-Crosstalk, der kontraktile Phänotypen feinjustiert.

PPP1R12C Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente PPP1R12C-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

PPP1R12C Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der PPP1R12C-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen PPP1R12C-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen PPP1R12C-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.