Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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PPOX Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422376
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- PPOX Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico PPOX, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: PPOX Antibody (C-12): sc-271768
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
PPOX Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-422376 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Il gene murino Ppox codifica la protoporfirinogeno ossidasi (PPOX), un enzima della membrana interna mitocondriale che catalizza l’ossidazione della protoporfirinogeno IX a protoporfirina IX nelle fasi terminali della biosintesi dell’eme. Controllando il flusso attraverso la via delle porfirine, PPOX sostiene la produzione di emoproteine necessarie per la fosforilazione ossidativa, la funzione dei citocromi e l’omeostasi redox cellulare. L’alterazione dell’attività di PPOX può compromettere il metabolismo mitocondriale e aumentare gli intermedi porfirinici, collegando questo nodo del metabolismo dell’eme alle porfirie associate a fotosensibilità e a fenotipi più ampi di stress ossidativo. Ppox è quindi rilevante per studiare la bioenergetica mitocondriale, i programmi di differenziamento eritroide e il crosstalk metabolico tra disponibilità di eme e gestione delle specie reattive dell’ossigeno.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PPOX (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ppox in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ppox insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ppox a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PPOX.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ppox per lo studio della segnalazione di PPOX, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Ppox critici per la funzione di PPOX
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ppox per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal PPOX CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal PPOX CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ppox. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal PPOX Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR PPOX (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ppox per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ppox definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.