Plasmide CRISPR d'Activation (h) PPARβ: sc-400523-ACT

PPARD code le récepteur activé par les proliférateurs de peroxysomes bêta (PPARβ), un récepteur nucléaire activé par des ligands qui agit comme facteur de transcription en régulant la gestion des lipides, l’homéostasie du glucose et la dépense énergétique. PPARβ coordonne des programmes géniques impliqués dans l’oxydation des acides gras, la fonction mitochondriale et le remodelage métabolique adaptatif, en intégrant des signaux issus de médiateurs lipidiques pour contrôler la différenciation cellulaire et le tonus inflammatoire. Dans les tissus humains, l’activité de PPARD est liée au métabolisme du muscle squelettique, à la biologie des kératinocytes et à la polarisation des macrophages, en interaction avec des voies telles que la signalisation PPAR et, plus largement, les réseaux des récepteurs nucléaires. Une signalisation PPARβ dérégulée a été associée à des phénotypes métaboliques et inflammatoires et est fréquemment étudiée dans des contextes incluant la sensibilité à l’insuline, la dyslipidémie et l’adaptation métabolique des cellules tumorales.

PPARβ Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PPARD sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PPARβ Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PPARD dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PPARD, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PPARβ. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PPARD natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PPARβ au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PPARβ dans les cellules tumorales présentant une expression de PPARD silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.