Plasmide CRISPR d'Activation (h) PPARα: sc-400238-ACT

PPARα (récepteur alpha activé par les proliférateurs de peroxysomes) est un facteur de transcription, récepteur nucléaire activé par des ligands, qui coordonne le catabolisme des lipides et l’homéostasie énergétique dans les cellules humaines. Il régule des programmes géniques contrôlant la β‑oxydation mitochondriale et peroxysomale, le transport des acides gras, la cétogenèse et le métabolisme des lipoprotéines, en intégrant des signaux métaboliques aux réponses transcriptionnelles via des éléments de réponse aux PPAR. L’activité de PPARα interagit avec les voies de signalisation de l’AMPK et de l’insuline et module l’expression de gènes inflammatoires par des interactions croisées avec NF‑κB et d’autres récepteurs nucléaires. La dérégulation des voies associées à PPARA est fréquemment étudiée dans des contextes tels que le syndrome métabolique, la dyslipidémie, la stéatose hépatique non alcoolique et le remodelage cardiométabolique, ce qui en fait un nœud central pour les études mécanistiques du stress cellulaire induit par les lipides.

PPARα Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PPARA sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PPARα Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PPARA dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PPARA, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PPARα. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PPARA natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PPARα au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PPARα dans les cellules tumorales présentant une expression de PPARA silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.