PP2B-Aβ CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-422384
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- PP2B-Aβ Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im PP2B-Aβ-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: PP2B-Aβ: sc-365612
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
PP2B-Aβ CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) | sc-422384 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
Ppp3cb kodiert die murine katalytische Untereinheit beta von Calcineurin (PP2B-Aβ), eine Ca2+/Calmodulin-abhängige Serin/Threonin-Phosphatase, die Calciumsignale in Veränderungen des Phosphorylierungszustands zahlreicher Substrate übersetzt. PP2B-Aβ ist ein zentraler Knotenpunkt der calciumabhängigen Signalübertragung, reguliert insbesondere Transkriptionsfaktoren der NFAT-Familie und prägt Programme, die mit neuronaler Erregbarkeit, synaptischer Plastizität und aktivitätsabhängiger Genexpression verknüpft sind. Durch koordinierte Dephosphorylierungsereignisse beeinflusst Calcineurin die Umgestaltung des Zytoskeletts, den Vesikeltransport sowie stressresponsive Signalkaskaden. Eine fehlregulierte Calcineurin-Aktivität und PPP3CB-assoziierte Signalwege wurden mit neuroentwicklungsbezogenen und neuropsychiatrischen Phänotypen in Verbindung gebracht, ebenso mit weiteren Kontexten, in denen eine aberrante Calcium-Signalgebung zu krankheitsrelevanten zellulären Zuständen beiträgt.
Das PP2B-Aβ CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Ppp3cb-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Ppp3cb-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Ppp3cb nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PP2B-Aβ-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Ppp3cb-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PP2B-Aβ-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf Ppp3cb-Exone abzielen, die für die PP2B-Aβ-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere Ppp3cb-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom PP2B-Aβ CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom PP2B-Aβ CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Ppp3cb-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PP2B-Aβ HDR-Plasmid (m) und PP2B-Aβ HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Ppp3cb-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Ppp3cb-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.