Plasmide Double Nickase (h) POU2F3: sc-417495-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) POU2F3 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide POU2F3 Double Nickase (h) et le plasmide POU2F3 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant POU2F3. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: POU2F3 Antibody (6D1): sc-293402
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) POU2F3 | sc-417495-NIC | 20 µg | $410.00 |
POU2F3 code un facteur de transcription à domaine POU qui pilote des programmes d’expression génique spécifiques de lignée dans les cellules épithéliales, avec des rôles majeurs dans la différenciation et le maintien de l’identité des cellules tuft/chémosensorielles. En se liant à des motifs octamères et en coordonnant des réseaux transcriptionnels, POU2F3 influence l’état de la chromatine et les voies en aval qui contrôlent les décisions de destin cellulaire, les fonctions associées à la barrière et la signalisation en réponse au stress. Une expression dérégulée de POU2F3 a été associée à des états altérés de différenciation épithéliale et fait fréquemment l’objet d’études dans le cadre de la plasticité de lignée et de la reprogrammation transcriptionnelle en biologie du cancer. En tant que régulateur maître, il constitue un point d’entrée utile pour analyser comment les facteurs de transcription façonnent l’identité cellulaire et des sorties de signalisation dépendantes du contexte.
POU2F3 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus POU2F3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de POU2F3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de POU2F3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de POU2F3.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.