Plasmide CRISPR d'Activation (h) Positive cofactor 4: sc-403272-ACT

Le gène humain **SUB1** code le **cofacteur positif 4 (PC4)**, un coactivateur transcriptionnel se liant à l’ADN qui module la transcription par l’ARN polymérase II en stabilisant les complexes de pré‑initiation et en coordonnant l’expression génique dépendante des activateurs. PC4 participe également au maintien du génome en influençant les réponses aux dommages de l’ADN et la dynamique de la chromatine associée à la réparation, reliant le contrôle transcriptionnel au stress de réplication et aux programmes cellulaires de récupération. À travers ces fonctions, SUB1/PC4 a été étudié dans des voies régissant la progression du cycle cellulaire, la transcription induite par le stress et l’équilibre entre transcription et réparation de l’ADN. Une activité dérégulée de PC4 ainsi que des profils d’expression altérés de SUB1 ont été rapportés dans de multiples contextes pertinents pour les maladies, ce qui soutient son intérêt en tant que nœud mécanistique pour analyser la stabilité du génome couplée à la transcription.

Positive cofactor 4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SUB1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Positive cofactor 4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SUB1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SUB1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Positive cofactor 4. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SUB1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Positive cofactor 4 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Positive cofactor 4 dans les cellules tumorales présentant une expression de SUB1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.