POPX2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406536

Übersicht

PPM1F kodiert die Serin/Threonin-Proteinphosphatase POPX2 (PP2C-Familie), einen Regulator phosphorylierungsabhängiger Signalwege, der als Gegenspieler von Kinase-Kaskaden wirkt, welche die Zytoskelettdynamik und zellzyklusassoziierte Prozesse steuern. POPX2 wird mit der Modulation des Aktin-Remodelings und der Zellmotilität in Verbindung gebracht, indem es ausgewählte Substrate in Rho-GTPase-gekoppelten und stressresponsiven Netzwerken dephosphoryliert und so Signale integriert, die Adhäsion und gerichtete Migration beeinflussen. Durch die Feinabstimmung dieser Signalknoten kann POPX2 in Modellsystemen zelluläre Antworten wie Proliferation, Überleben und invasives Verhalten prägen. Eine dysregulierte Phosphataseaktivität sowie veränderte PPM1F/POPX2-Expression wurden in Zusammenhängen beschrieben, die für die Krebsbiologie und andere Erkrankungen relevant sind, bei denen gestörte Phosphorylierungs-Signalgebung die Gewebehomöostase beeinträchtigt.

Das POPX2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des PPM1F-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des PPM1F-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von PPM1F nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die POPX2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von PPM1F-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der POPX2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf PPM1F-Exone abzielen, die für die POPX2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere PPM1F-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom POPX2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom POPX2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des PPM1F-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das POPX2 HDR-Plasmid (h) und POPX2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von PPM1F-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten PPM1F-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.