Plasmide CRISPR d'Activation (h) POLDIP3: sc-413603-ACT

La POLDIP3 humaine (polymerase delta interacting protein 3), également appelée SKAR, est un facteur régulateur qui fait le lien entre la maturation de l’ARNm et la traduction, et favorise l’expression efficace des transcrits épissés. Elle participe au métabolisme de l’ARN et à des processus associés aux ribosomes, notamment au couplage de la signalisation associée au complexe de jonction d’exons (EJC) avec la production traductionnelle, influençant ainsi la croissance cellulaire et les programmes d’expression génique sensibles au stress. Par ces activités, POLDIP3 affecte des voies qui contrôlent la prolifération et le maintien du génome, ce qui la rend pertinente pour l’étude de la traduction et de la maturation de l’ARN dérégulées observées dans le cancer et d’autres troubles prolifératifs ou liés au stress. Ses connexions fonctionnelles avec les contrôles transcriptionnels et post-transcriptionnels font également de POLDIP3 un nœud utile pour analyser la régulation de l’expression génique dans les cellules humaines.

POLDIP3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de POLDIP3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

POLDIP3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus POLDIP3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription POLDIP3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de POLDIP3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus POLDIP3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de POLDIP3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie POLDIP3 dans les cellules tumorales présentant une expression de POLDIP3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.