PNUTS CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-424580
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- PNUTS Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im PNUTS-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: PNUTS: sc-271681
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
PNUTS CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) | sc-424580 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
Das Mausgen *Ppp1r10* kodiert PNUTS (Proteinphosphatase‑1‑Regulatoruntereinheit 10), ein nukleäres Gerüstprotein, das PP1 an Chromatin sowie an RNA‑assoziierte Komplexe rekrutiert, um eine phosphorylierungsabhängige Kontrolle der Genexpression zu koordinieren. PNUTS ist an der Transkriptionsregulation, der Signalgebung der DNA‑Schadensantwort und der Kontrolle von Zellzyklus‑Checkpoints beteiligt und beeinflusst dabei Prozesse wie den Umgang mit Replikationsstress und die Aufrechterhaltung der Genomstabilität. Durch Interaktionen mit Faktoren der Chromatinorganisation und RNA‑Prozessierung trägt PNUTS dazu bei, Phosphorylierungsdynamik mit Transkriptionselongation und RNA‑Biogenese zu koppeln. Eine Fehlregulation der PP1–PNUTS‑Signalgebung wurde mit veränderten Proliferationsprogrammen und Phänotypen der Genominstabilität in Verbindung gebracht, die für mechanistische Studien krebsassoziierter Signalwege und der Neurobiologie relevant sind.
Das PNUTS CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Ppp1r10-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Ppp1r10-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Ppp1r10 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PNUTS-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Ppp1r10-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PNUTS-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf Ppp1r10-Exone abzielen, die für die PNUTS-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere Ppp1r10-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom PNUTS CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom PNUTS CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Ppp1r10-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PNUTS HDR-Plasmid (m) und PNUTS HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Ppp1r10-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Ppp1r10-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.