Plásmido Doble Nickase (m) PMM2: sc-424790-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)PMM2 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa PMM2 (m) y el plásmido de doble nickasa PMM2 (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Pmm2. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) PMM2 | sc-424790-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (m2) PMM2 | sc-424790-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El gen murino **Pmm2** codifica la fosfomanomutasa 2 (PMM2), una enzima citosólica que interconvierte manosa-6-fosfato y manosa-1-fosfato para sostener la biosíntesis de GDP-manosa y de oligosacáridos unidos a dolicol. Esta actividad vincula a **Pmm2** con la N-glicosilación y con procesos más amplios de ensamblaje de glicanos que influyen en el plegamiento y el tráfico de proteínas, así como en las interacciones con la matriz extracelular. La alteración de la función de PMM2 desestabiliza la proteostasis y los patrones de glicosilación en la superficie celular, afectando la homeostasis de la vía secretora y la señalización intercelular. Por ello, **Pmm2** se estudia ampliamente en modelos de trastornos congénitos de la glicosilación y en análisis a nivel de sistemas sobre la regulación del desarrollo, la inmunidad y el metabolismo dependiente de glicanos.
PMM2 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Pmm2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Pmm2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Pmm2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Pmm2 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.