PMCA1 Double Nickase Plasmid (h): sc-402691-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das PMCA1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- PMCA1 Double-Nickase-Plasmid (h) und PMCA1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ATP2B1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: PMCA1: sc-398413
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
PMCA1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-402691-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PMCA1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402691-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ATP2B1 kodiert die Plasmamembran-Ca2+-transportierende ATPase 1 (PMCA1), eine hochaffine Ca2+-Effluxpumpe, die niedrige zytosolische Calciumspiegel aufrechterhält und die Dynamik calciumabhängiger Signalwege mitprägt. PMCA1 koppelt die ATP-Hydrolyse an die Extrusion von Ca2+ und unterstützt dadurch Prozesse wie Erregbarkeit, Sekretion, Zellzyklusprogression und calciumabhängige Transkription über Signalwege, die mit Calmodulin, Calcineurin/NFAT und CaMK verknüpft sind. Durch die Regulation lokaler Ca2+-Mikrodomänen an der Plasmamembran beeinflusst PMCA1 die Funktion von Endothel- und glatten Muskelzellen, die neuronale Homöostase sowie die Integrität von Barrieren. Genetische und funktionelle Störungen von ATP2B1 wurden mit kardiovaskulären und neurovaskulären Phänotypen in Verbindung gebracht, darunter die Blutdruckregulation und Defekte in der Calcium-Handhabung, die für mechanistische Krankheitsmodelle in humanen Zellen relevant sind.
PMCA1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ATP2B1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ATP2B1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ATP2B1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ATP2B1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.