Plasmide CRISPR d'Activation (h) Plk: sc-400411-ACT

Le gène humain **PLK1** code la polo-like kinase 1 (Plk), une kinase sérine/thréonine qui coordonne l’entrée en mitose et sa progression en régulant la maturation des centrosomes, l’assemblage du fuseau bipolaire, l’attachement kinétochore–microtubule et la cytocinèse. L’activité de **PLK1** s’intègre à la signalisation **CDK1–cycline B** ainsi qu’aux réseaux de phosphorylation qui contrôlent la ségrégation des chromosomes et le point de contrôle d’assemblage du fuseau. Une expression ou une activité dérégulée de **PLK1** perturbe la stabilité génomique et le contrôle du cycle cellulaire, des caractéristiques fréquemment étudiées dans des états cellulaires à prolifération rapide et dans des phénotypes associés aux tumeurs. En tant que nœud central de la signalisation mitotique, **PLK1** est largement utilisé comme lecture fonctionnelle dans les études portant sur la prolifération, la régulation des checkpoints et les réponses au stress liées à la mitose.

Plk Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PLK1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Plk Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PLK1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PLK1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Plk. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PLK1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Plk au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Plk dans les cellules tumorales présentant une expression de PLK1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.