plexin-A1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403043-ACT

Das humane Gen **PLXNA1** kodiert **Plexin-A1**, einen transmembranen Rezeptor, der in Partnerschaft mit **Neuropilinen** an **Semaphorine der Klasse 3** bindet, um Leitsignale zu regulieren, die das **Zytoskelett-Remodeling**, **Adhäsion** und **gerichtete Zellmigration** steuern. Die Plexin-A1-Signalgebung ist mit **Rho-Familien-GTPasen** und nachgeschalteten **Kinase-Netzwerken** verknüpft und koordiniert so **Axonleitfindung**, **dendritische Musterbildung** und den **Transport von Immunzellen**. In nicht-neuronalen Kontexten trägt **PLXNA1** zur Gewebeorganisation sowie zu vaskulären und stromalen Interaktionen bei, indem es Motilität und kontaktabhängige Antworten moduliert. Eine fehlregulierte Semaphorin–Plexin-Signalgebung unter Beteiligung von **PLXNA1** wurde mit veränderten neuroentwicklungsbezogenen Prozessen und mit Verhaltensweisen im Tumormikromilieu in Verbindung gebracht, was es zu einem nützlichen Knotenpunkt für mechanistische Studien von Leit- und Migrationswegen macht.

plexin-A1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen PLXNA1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

plexin-A1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des PLXNA1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der PLXNA1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen plexin-A1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native PLXNA1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von plexin-A1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des plexin-A1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem PLXNA1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.