PLEKHG5 Plasmide Double Nickase (h): sc-418543-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- PLEKHG5 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il PLEKHG5 Double Nickase Plasmid (h) e il PLEKHG5 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira PLEKHG5. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: PLEKHG5 Antibody (5A9): sc-517108
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
PLEKHG5 Plasmide Double Nickase (h) | sc-418543-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PLEKHG5 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-418543-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PLEKHG5 codifica un fattore di scambio di nucleotidi guaninici (GEF) per Rho contenente un dominio di omologia con la pleckstrina, che promuove l’attivazione delle GTPasi della famiglia Rho, collegando la segnalazione dei fosfoinositidi al rimodellamento del citoscheletro di actina, al traffico di membrana e alla polarità cellulare. Attraverso la regolazione di vie dipendenti da RhoA/CDC42, PLEKHG5 influenza processi quali la crescita dei neuriti, il trasporto vescicolare e la segnalazione in risposta allo stress. Alterazioni della funzione di PLEKHG5 sono state associate a fenotipi neuromuscolari e neurodegenerativi, in linea con un ruolo nel mantenimento dei motoneuroni e nell’omeostasi assonale. Queste caratteristiche rendono PLEKHG5 un bersaglio utile per analizzare la dinamica del citoscheletro e i meccanismi di segnalazione in modelli cellulari umani.
PLEKHG5 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus PLEKHG5 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di PLEKHG5. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di PLEKHG5. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con PLEKHG5 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.