Plasmide CRISPR/Cas9 KO PLEKHG4B (h): sc-407381

Présentation

PLEKHG4B code une protéine de type facteur d’échange de nucléotides de guanine (GEF) pour Rho, contenant des domaines d’homologie à la pleckstrine (PH) et des domaines apparentés aux RhoGEF, impliqués dans le couplage de la signalisation des phosphoinositides à la régulation des petites GTPases. En modulant l’activité des GTPases de la famille Rho, PLEKHG4B est associé au contrôle de la dynamique du cytosquelette d’actine, du trafic membranaire et des programmes de morphologie cellulaire qui influencent l’adhérence et la motilité. Les profils d’expression et les associations au sein des réseaux de signalisation situent PLEKHG4B dans des contextes plus larges, recoupant des voies pertinentes pour le système neuronal et immunitaire, où le remodelage du cytosquelette constitue un facteur limitant. La dérégulation de la signalisation des GTPases Rho et des processus dépendants du cytosquelette est fréquemment associée à des phénotypes neurodéveloppementaux et neurodégénératifs, ainsi qu’à un comportement invasif dans des modèles de cancer, ce qui motive l’étude fonctionnelle de PLEKHG4B dans des travaux mécanistiques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PLEKHG4B (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PLEKHG4B dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PLEKHG4B, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PLEKHG4B à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PLEKHG4B.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PLEKHG4B pour l'étude de la signalisation de PLEKHG4B, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PLEKHG4B essentiels à la fonction de PLEKHG4B
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PLEKHG4B pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PLEKHG4B plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le PLEKHG4B plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PLEKHG4B. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PLEKHG4B plasmide HDR (h) et le PLEKHG4B (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PLEKHG4B pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PLEKHG4B définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.