Particules Lentivirales d'Activation (h) PLC γ2: sc-400451-LAC

Le gène humain **PLCG2** code la phospholipase Cγ2 (PLCγ2), une enzyme de transduction du signal qui hydrolyse le PIP2 pour générer l’IP3 et le DAG, mobilisant ainsi le Ca2+ intracellulaire et activant des programmes dépendants de la PKC. PLCγ2 agit en aval des voies de signalisation des immunorécepteurs à motif tyrosine et des récepteurs tyrosine kinases, en intégrant des signaux issus du récepteur des cellules B, des récepteurs Fc et d’autres complexes dépendants d’adaptateurs afin de réguler l’activation, les réponses cytokiniques et le remodelage du cytosquelette. Par ses rôles dans les flux calciques et les voies associées à la MAPK/NF-κB, **PLCG2** est un élément central du fonctionnement des cellules immunitaires innées et adaptatives. Des altérations génétiques et une signalisation PLCγ2 dérégulée ont été associées à des troubles de la régulation immunitaire et à des phénotypes inflammatoires, ce qui en fait un nœud pertinent pour des études mécanistiques des réseaux de signalisation immunitaire.

Les particules d'activation lentivirales PLC γ2 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de PLCG2 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales PLC γ2 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription PLCG2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de PLC γ2. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif PLCG2 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.