Plasmide CRISPR d'Activation (h) plasminogen: sc-401410-ACT

Le gène humain **PLG** code le plasminogène, un zymogène d’origine hépatique qui est converti en plasmine pour assurer la fibrinolyse et une protéolyse extracellulaire étendue. Par ses interactions avec les activateurs du plasminogène de type tissulaire et de type urokinase, ainsi qu’avec les inhibiteurs de la plasmine, le plasminogène régule la résolution des caillots, le remodelage de la matrice extracellulaire et la migration cellulaire, en lien avec la réparation tissulaire et les réseaux de protéases impliqués dans l’inflammation. L’activité de la plasmine influence aussi la protéolyse péricellulaire et la biodisponibilité des facteurs de croissance, reliant **PLG** à l’homéostasie vasculaire et aux voies de remodelage tissulaire. Une altération de la fonction ou de la régulation du plasminogène est associée à une clairance dérégulée de la fibrine et à un déséquilibre des protéases dans des contextes de maladies thrombotiques et inflammatoires, soutenant des études mécanistiques en hémostase et en biologie de la matrice.

plasminogen Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PLG sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

plasminogen Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PLG dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PLG, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de plasminogen. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PLG natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de plasminogen au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie plasminogen dans les cellules tumorales présentant une expression de PLG silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.