plasma kallikrein Double Nickase Plasmid (h): sc-402237-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das plasma kallikrein Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- plasma kallikrein Double-Nickase-Plasmid (h) und plasma kallikrein Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf KLKB1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
plasma kallikrein Double Nickase Plasmid (h) | sc-402237-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
plasma kallikrein Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402237-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
KLKB1 kodiert Plasma-Kallikrein, eine Serinprotease, die zentral für das Kontaktsystem und den Kallikrein–Kinin‑Signalweg ist. Dort spaltet es hochmolekulares Kininogen, setzt Bradykinin frei und moduliert so die Gefäßpermeabilität sowie inflammatorische Signalprozesse. Die Aktivität von Plasma-Kallikrein ist über eine wechselseitige Aktivierung mit Faktor XII mit der intrinsischen Gerinnung und fibrinolytischen Prozessen verknüpft und verbindet Proteolyse mit der hämostatischen Balance. Eine dysregulierte KLKB1‑Funktion wurde mit veränderter Bradykininbildung und Signalen des Kontaktwegs in Zusammenhang gebracht, die für entzündliche Ödem‑Phänotypen und thrombosebezogene Mechanismen relevant sind. Als zirkulierende Protease mit definierten Substraten und regulatorischen Inhibitoren ist Plasma-Kallikrein ein nützlicher Ansatzpunkt, um Proteasekaskaden und plasmabasierte Signalgebung in endothelialen und immunologischen Kontexten zu untersuchen.
plasma kallikrein Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des KLKB1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von KLKB1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die KLKB1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit KLKB1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.