Plásmido CRISPR de Activación (h) PLAC8: sc-405093-ACT

PLAC8 (placenta associated 8) codifica una proteína pequeña rica en cisteína, implicada en la regulación de la diferenciación celular, la plasticidad epitelio‑mesenquimal y la señalización relacionada con la inmunidad innata. En células humanas, PLAC8 se ha vinculado a la modulación de programas de proliferación y respuesta al estrés, incluidas vías conectadas con la autofagia, el equilibrio redox y la remodelación del citoesqueleto. Se han descrito alteraciones en la expresión de PLAC8 en múltiples contextos patológicos, en particular en cánceres, donde se correlaciona con cambios en la invasión, fenotipos asociados a metástasis y las interacciones con el microambiente tumoral. Estas características hacen de PLAC8 un nodo útil para estudios mecanísticos del control transcripcional, las transiciones de estado celular y las salidas de señalización dependientes del contexto.

PLAC8 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PLAC8 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

PLAC8 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PLAC8 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PLAC8, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de PLAC8. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PLAC8 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de PLAC8 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía PLAC8 en células tumorales con expresión de PLAC8 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.