PKR Double Nickase Plasmid (rabbit): sc-437324-NIC
- Zielspezies: rabbit
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das PKR Double Nickase Plasmid (rabbit) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- PKR Double-Nickase-Plasmid (rabbit) und PKR Double-Nickase-Plasmid (rabbit2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
PKR Double Nickase Plasmid (rabbit) | sc-437324-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PKR Double Nickase Plasmid (rabbit2) | sc-437324-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PKR (EIF2AK2) ist eine durch doppelsträngige RNA aktivierte Serin/Threonin-Kinase, die als zentraler Sensor für viralen und endogenen RNA‑Stress fungiert und die angeborene Immunerkennung mit der Kontrolle der Translation verknüpft. Nach Aktivierung phosphoryliert PKR eIF2α, um die globale Proteinsynthese zu drosseln, und moduliert die Signalübertragung über NF‑κB-, MAPK- und interferon-stimulierte Gen-Netzwerke, wodurch antivirale und entzündliche Antworten geprägt werden. PKR trägt außerdem zur Dynamik von Stressgranula, zur Apoptose und zur Regulation der Zytokinproduktion bei und steht damit an der Schnittstelle zwischen Proteostase und Immunsignalgebung. Eine fehlregulierte PKR‑Aktivität wurde mit chronischer Entzündung, metabolischer Dysfunktion und Neurodegeneration in Verbindung gebracht, was PKR zu einem relevanten Knotenpunkt für mechanistische Studien in Kaninchenmodellen und primären Zellsystemen macht.
PKR Das Double-Nickase-Plasmid (rabbit) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des -Lokus in rabbit-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die -Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit -Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.